Validation d’une méthode d’analyse
Document de ref de l’indus pharm :
ICH :international conference on harmonisation of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use
But:harmoniser ≠ts points aui apparaissent ds dossier pharm
Þrecommandation pour enregistrer les dossier
ds UE ,USA ,japon + pays spectateurs
ce n’est pas une loi
95 →texte de validation des procédures d’analyse qui fixe le vocabulaire
97 →validation des procédures d’analyse :méthodologie
édité en anglais
$ texte en prep à la pharmacopée européenne
•procédure :méthode d’analyse
doc écrit :description détaillée de toutes les opérations nécessaire pour décrire l’analyse de la substance
-prod chimique ,mode de fab des réactifs ,des solution étalons ,type d’appareillage ,cdt° opératoire …
-séquences des injections … si chromato
-mode de calculs .. ;
càd de la pesée de l’ech au mode de calcul
•validation
but :démontrer (apporter preuves tangibles) que la procédure correspond à l’usage (un usage det)
pour lequel elle est prévue
si chgt mode de $ →procédure chgt →à réaliser
formulation
critère testés :
•spécificité/sélectivité
•linéarité de la gamme d’étalonnage
•fidélité →répétabilité
→fidélité
→reproductibilité
•intervalle d’appli
•limite de détection
•limite de quantification
•stabilité des solutions
certains critères selon si dosage prod principal ou impuretés
Exemple :Validation d’une procédure d’analyse de l’acide acétyl salicylique ds comprimés / CLHP
Procédure avec :
•prep de l’ech à analyser
conc de l’extrait 100 mg/l théorique en PA
injection ,aire
•prep d’une solution étalon de PA à 100 mg/L :
injection ,aire
calcul qtité aspirine /cprimé
1/ spécificité /sélectivité
→meth spécifique si ≠cie analyte et substances potentiellement interférentes
→vérifiées / injection
-cstituants de la matrice (excipients)
-prod de décompo (ASA…)
2/ linéarité de la gamme d’étalonnage
relation linéaire vs signal et conc en asp
→ 5 solutions étalons de Pa (80 à 120% de la conc cibles ,soit 100mg/L du dosage)
80,90,100,110,120
Þexamen visuel du graphe :
équation de la dte Y=aX+b
test T pour vérif si ordonnée à l’ori négligeable
r,r²
analyse de variance (signif de la linéarité) ,intervalle de confiance sur pente et ordonnée à l’ori
→permet ut une seule solution étalon en dosage de routine
3/exactitude « accurancy » » qlq fois appelé justesse
bonne étroitesse d’accord vs valeur trouvée et valeur acceptée comme vraie
exact non fidèle
exact fidèle
inexacte non fidèle
inexacte fidèle
exactitude →erreurs systématiques (pas due au hasard)
•valeur trouvée par procédure / valeur trouvée avec une procédure de ref
ou valeur trouvée par méthode en l’appliquant à des ech reconstitués prep avec qtité connues d’analytes (80 à 120% qtité PA ds formulation /valeur ajouté théoriquement
→prep comprimé sur et sous dosés et vérif par résultats
reconstitué excipients (mg) PA (mg)
1 500 400
2 500 450
3 500 500
4 500 550
5 500 600
prep des ech à analyser (conc théorique 80 ,90 ,100 ,110 ,120 mg/L PA)
injection ,aire
dosage chaque solution par rapport à étalon PA (100 mg/L)
calcul qtité PA /comprimé
exactitude vérifiée par comparaison
prep ech à analyser …
…dosage de chaque reconstitué par rapport à l’étalon PA (100 mg/L)
calcul de la quantité de PA/comprimé
calcul à chaque conc de l’erreur relative ±% du taux de recouvrement
reconstitué qtité ajoutée qtité trouvée ER% TR%
fiole 1 400 398 -0.5% 99.5%
2 450 455 +1.11% 101.11%
3 500 493 -1.40% 98.60%
4 550 559 +1.64% 101.64%
5 600 610 +1.66% 101.66%
ER%=qtité trouvée – qtité ajoutée / qtité réelle x100
TR%=qtité trouvée/qtité ajouté x100
4 Fidélité (« précision » en anglais)
étroitesse d’accord (degré de dispersion) vs une série de mesure obtenue ds cdt° prescrites à partir de prises d’essais multiples provenant d’un même ech homogène
la fidélité se réfère aux erreurs aléatoires (et non aux erreurs systématiques)
•répétabilité r
▪fidélité intermédiaire
▪reproductibilité R
♦Répétabilité « repeatability »
Fidélité ds des cdt° opératoires idq et ds un court intervalle de tps
Détermination indpdte à partir d’un même ech
•m^ analyte
•m^équipement
•m^labo
•courte période de tps
Þvérifier en appliquant n fois la procédure sur un même ech(n>6) svt au pt 100% (sur comprimés réels)
résultats 495 505 496 507 498 502 mg PA / comprimé
moyenne :500.5 mg → ER = 0.5/500x100
écart type s=4.93 mg TR=505.5/500x100
CV%=(s/moy)100=0.98%
♦fidélité intermédiaire (intermediate precision)
variabilité intralabo :jours ≠ ,analystes ≠ ,équipements …
détermination indpdte à partir d’un même ech
•≠ analystes
et/ou •≠ équipements
et/ou •≠tes périodes de tps
→spécifier les cdt° modifiées
♦Reproductibilité « reproductibility »
variation interlabo (études collaboratives)
détermination indpdte à partir d’un même ech
≠ts labo
→fidélité exprimée :écart type s ,CV% (coefft de variation)
5 Intervalle de validité « range »
intervalle ds lequel il a été démontré que la procédure d’analyse présente une fidélité ,une exactitude et une linéarité satisfaisante
applicable vs 400 et 600 mg PA/comprimé
6 limite de détection (pour impuretés)
+ petite qtité d’analyte qui peut être détectée
→rapport s/b=3 =signal de l’analyte / bruit de la ligne de base
7 limites de quantification (« qtification limit »)
qtité la + faible d’analyte qui peut être det de façon qtitative avec une fidélité et une exactitude appropriée
exactitude tolère une erreur de ±10-15%
8 stabilité des solution (pdt combien de tps peut in garder sol° ? à noter ds protocole)
→vérifier sur T>16H :injecteur automatique
Fr sol° fraïche /Fr sol° vielle
Tester stabilité ech pdt au – 16 H
Faire viellir sol° pdt 16H que l’on injecte à coté d’une sol° fraîche puis comparer facteurs de réponse
CL :
Qd on veut valider meth ,$ protocole pré établit
Mais $ recommandations validée/Inserm
En routine ,qd on applique 1 méthode d’analyse ,il faut vérifier avant de faire seuil de dosage ,les paramètres chromato càd :
la résolution vs paire critiques de cposé ,
le nbre de plateau théorique N,
la Tr
répétabilité d’injection successives de même sol° (>6 inj)
→ceci permet de vérifier les cdt° opératoire
Plan :
Validation d’une méthode d’analyse
Document de ref de l’indus pharm :
ICH :international conference on harmonisation of technical requirements for registration of pharmaceuticals for human use
But:harmoniser ≠ts points aui apparaissent ds dossier pharm
Þrecommandation pour enregistrer les dossier
ds UE ,USA ,japon + pays spectateurs
ce n’est pas une loi
95 →texte de validation des procédures d’analyse qui fixe le vocabulaire
97 →validation des procédures d’analyse :méthodologie
édité en anglais
$ texte en prep à la pharmacopée européenne
•procédure :méthode d’analyse
doc écrit :description détaillée de toutes les opérations nécessaire pour décrire l’analyse de la substance
-prod chimique ,mode de fab des réactifs ,des solution étalons ,type d’appareillage ,cdt° opératoire …
-séquences des injections … si chromato
-mode de calculs .. ;
càd de la pesée de l’ech au mode de calcul
•validation
but :démontrer (apporter preuves tangibles) que la procédure correspond à l’usage (un usage det)
pour lequel elle est prévue
si chgt mode de $ →procédure chgt →à réaliser
formulation
critère testés :
•spécificité/sélectivité
•linéarité de la gamme d’étalonnage
•fidélité →répétabilité
→fidélité
→reproductibilité
•intervalle d’appli
•limite de détection
•limite de quantification
•stabilité des solutions
certains critères selon si dosage prod principal ou impuretés
Exemple :Validation d’une procédure d’analyse de l’acide acétyl salicylique ds comprimés / CLHP
Procédure avec :
•prep de l’ech à analyser
conc de l’extrait 100 mg/l théorique en PA
injection ,aire
•prep d’une solution étalon de PA à 100 mg/L :
injection ,aire
calcul qtité aspirine /cprimé
1/ spécificité /sélectivité
→meth spécifique si ≠cie analyte et substances potentiellement interférentes
→vérifiées / injection
-cstituants de la matrice (excipients)
-prod de décompo (ASA…)
2/ linéarité de la gamme d’étalonnage
relation linéaire vs signal et conc en asp
→ 5 solutions étalons de Pa (80 à 120% de la conc cibles ,soit 100mg/L du dosage)
80,90,100,110,120
Þexamen visuel du graphe :
équation de la dte Y=aX+b
test T pour vérif si ordonnée à l’ori négligeable
r,r²
analyse de variance (signif de la linéarité) ,intervalle de confiance sur pente et ordonnée à l’ori
→permet ut une seule solution étalon en dosage de routine
3/exactitude « accurancy » » qlq fois appelé justesse
bonne étroitesse d’accord vs valeur trouvée et valeur acceptée comme vraie
exact non fidèle
exact fidèle
inexacte non fidèle
inexacte fidèle
exactitude →erreurs systématiques (pas due au hasard)
•valeur trouvée par procédure / valeur trouvée avec une procédure de ref
ou valeur trouvée par méthode en l’appliquant à des ech reconstitués prep avec qtité connues d’analytes (80 à 120% qtité PA ds formulation /valeur ajouté théoriquement
→prep comprimé sur et sous dosés et vérif par résultats
reconstitué excipients (mg) PA (mg)
1 500 400
2 500 450
3 500 500
4 500 550
5 500 600
prep des ech à analyser (conc théorique 80 ,90 ,100 ,110 ,120 mg/L PA)
injection ,aire
dosage chaque solution par rapport à étalon PA (100 mg/L)
calcul qtité PA /comprimé
exactitude vérifiée par comparaison
prep ech à analyser …
…dosage de chaque reconstitué par rapport à l’étalon PA (100 mg/L)
calcul de la quantité de PA/comprimé
calcul à chaque conc de l’erreur relative ±% du taux de recouvrement
reconstitué qtité ajoutée qtité trouvée ER% TR%
fiole 1 400 398 -0.5% 99.5%
2 450 455 +1.11% 101.11%
3 500 493 -1.40% 98.60%
4 550 559 +1.64% 101.64%
5 600 610 +1.66% 101.66%
ER%=qtité trouvée – qtité ajoutée / qtité réelle x100
TR%=qtité trouvée/qtité ajouté x100
4 Fidélité (« précision » en anglais)
étroitesse d’accord (degré de dispersion) vs une série de mesure obtenue ds cdt° prescrites à partir de prises d’essais multiples provenant d’un même ech homogène
la fidélité se réfère aux erreurs aléatoires (et non aux erreurs systématiques)
•répétabilité r
▪fidélité intermédiaire
▪reproductibilité R
♦Répétabilité « repeatability »
Fidélité ds des cdt° opératoires idq et ds un court intervalle de tps
Détermination indpdte à partir d’un même ech
•m^ analyte
•m^équipement
•m^labo
•courte période de tps
Þvérifier en appliquant n fois la procédure sur un même ech(n>6) svt au pt 100% (sur comprimés réels)
résultats 495 505 496 507 498 502 mg PA / comprimé
moyenne :500.5 mg → ER = 0.5/500x100
écart type s=4.93 mg TR=505.5/500x100
CV%=(s/moy)100=0.98%
♦fidélité intermédiaire (intermediate precision)
variabilité intralabo :jours ≠ ,analystes ≠ ,équipements …
détermination indpdte à partir d’un même ech
•≠ analystes
et/ou •≠ équipements
et/ou •≠tes périodes de tps
→spécifier les cdt° modifiées
♦Reproductibilité « reproductibility »
variation interlabo (études collaboratives)
détermination indpdte à partir d’un même ech
≠ts labo
→fidélité exprimée :écart type s ,CV% (coefft de variation)
5 Intervalle de validité « range »
intervalle ds lequel il a été démontré que la procédure d’analyse présente une fidélité ,une exactitude et une linéarité satisfaisante
applicable vs 400 et 600 mg PA/comprimé
6 limite de détection (pour impuretés)
+ petite qtité d’analyte qui peut être détectée
→rapport s/b=3 =signal de l’analyte / bruit de la ligne de base
7 limites de quantification (« qtification limit »)
qtité la + faible d’analyte qui peut être det de façon qtitative avec une fidélité et une exactitude appropriée
exactitude tolère une erreur de ±10-15%
8 stabilité des solution (pdt combien de tps peut in garder sol° ? à noter ds protocole)
→vérifier sur T>16H :injecteur automatique
Fr sol° fraïche /Fr sol° vielle
Tester stabilité ech pdt au – 16 H
Faire viellir sol° pdt 16H que l’on injecte à coté d’une sol° fraîche puis comparer facteurs de réponse
CL :
Qd on veut valider meth ,$ protocole pré établit
Mais $ recommandations validée/Inserm
En routine ,qd on applique 1 méthode d’analyse ,il faut vérifier avant de faire seuil de dosage ,les paramètres chromato càd :
la résolution vs paire critiques de cposé ,
le nbre de plateau théorique N,
la Tr
répétabilité d’injection successives de même sol° (>6 inj)
→ceci permet de vérifier les cdt° opératoire